ⅠNuklein kislotasyigiriş
Nuklein kislotasy deoksiribonuklein kislotasyna (DNK) we ribonuklein kislotasyna (RNK) bölünýär, olaryň arasynda RNK ribosomal RNK (rRNA), habarçy RNA (mRNA) we dürli funksiýalaryna laýyklykda RNK (tRNA) bölünýär.DNK esasan ýadroda, mitohondriýada we hloroformda jemlenýär, RNK esasan sitoplazmada paýlanýar.Gen aňlatmagyň maddy esasy hökmünde nuklein kislotasynyň çykarylmagy molekulýar biologiýa gözleglerinde we kliniki molekulýar diagnozda örän möhüm rol oýnaýar.Nuklein kislotasynyň çykarylyşynyň konsentrasiýasy we arassalygy indiki PCR, yzygiderlilik, wektor gurluşygy, fermentleriň siňdirilmegi we beýleki synaglara gönüden-göni täsir eder.
Ⅱ Nuklein kislotasyny çykarmak we arassalamak usuly
Hen Fenol / hloroform çykarmak usuly
Fenol / hloroform çykarmak, DNK çykarmak üçin nusgawy usul bolup, esasan iki dürli organiki erginçini, suw fazasyndaky DNK esasly nuklein kislotasyny, organiki fazadaky lipidleri we iki fazanyň arasyndaky beloklary eritmek üçin ulanýar.Bu usul arzan bahadan, ýokary arassalykdan we gowy täsirden artykmaçlyklara eýe.Adetmezçilikleri çylşyrymly işlemek we uzak wagt.
Iz Trizol usuly
Trizol usuly, RNK çykarmak üçin nusgawy usul.Trizol usuly, hloroform bilen sentrifugadan soň suw fazasyna we organiki faza bölünýär, onda RNK suw fazasynda ereýär, suw fazasy täze EP turbasyna geçirilýär, izopropanol goşulandan soň ýagyş alynýar we etanol arassalanýar.Bu usul haýwan dokumalaryndan, öýjüklerden we bakteriýalardan RNK çykarmak üçin amatlydyr.
③ Merkezden gaçyryş sütünini arassalamak usuly
Merkezden gaçyryş sütünini arassalamak usuly, ýörite kremniy matrisa adsorbsion materiallary arkaly DNK-ny adsorb edip biler, RNK we belok bolsa rahat geçip biler, soň bolsa nuklein kislotasyny bölmek we arassalamak üçin ýokary duzly PH ulanyp biler.Üstünlikleri ýokary arassalama konsentrasiýasy, ýokary durnuklylyk, organiki çözüjä zerurlyk we arzan bahadyr..Etmezçiligi, ädimme-ädim merkezleşdirilmeli, has köp iş ädimleri.
④ Magnit monjuk usuly
Magnit monjuk usuly öýjük dokumasynyň nusgasyny lizatyň üsti bilen bölmek, nuklein kislotasyny nusgada goýbermek, soň bolsa nuklein kislotasynyň molekulalary magnit monjugynyň üstünde ýörite ýerleşdirilýär, beloklar we şeker ýaly hapalar bolsa suwuklyk.Öýjük dokumalarynyň bölünmegi, nuklein kislotasy bilen baglanyşdyrýan magnit monjuk, nuklein kislotasyny ýuwmak, nuklein kislotasyny ýok etmek we ş.m. arassa nuklein kislotasy ahyrsoňy alynýar.Üstünlikleri ýönekeý merkezden gaçyryş zerurlygy bolmazdan ýönekeý işlemek we gysga wagtlyk ulanmak.Tehniki talaplary pes we awtomatiki we köpçülikleýin işlemegi amala aşyryp biler.Magnit monjuk bilen nuklein kislotasynyň aýratyn utgaşmasy, çykarylan nuklein kislotasyny ýokary konsentrasiýa we arassalyk edýär.Adetmezçiligi, häzirki bazar bahasy birneme gymmat.
⑤ Beýleki usullar
Aboveokardaky dört usuldan başga-da, gaýnap duran döwük, konsentrirlenen duz usuly, anion ýuwujy usul, ultrases usuly we ferment usuly we ş.m. bar.
Ⅲ Nuklein kislotasyny çykarmagyň görnüşi
“Foregene” dünýäde öňdebaryjy göni PCR platformasy, iki sütünli RNA izolýasiýa platformasy (diňe DNK + RNA) bar.Esasy önümlere DNK / RNA izolýasiýa toplumlary, PCR we Direct PCR reagentleriniň molekulýar laboratoriýa reagentleri seriýasy girýär.
R Jemi RNK çykarmak
Jemi RNK çykarmak nusgalaryna gan, öýjükler, haýwan dokumalary, ösümlikler, wiruslar we ş.m. girýär. RT-PCR-de, çip derňewinde, vitro terjimesinde ulanylyp bilinjek umumy RNK çykarmak arkaly ýokary arassalygy we umumy konsentrasiýasyny alyp bolýar. molekulýar klonlaşdyrma, Dot Blot we beýleki synaglar.
Foregene bilen baglanyşyklyRNK izolýasiýa toplumlary
Haýwanlaryň jemi RNK izolýasiýa toplumy--Dürli haýwan dokumalaryndan ýokary arassalygy we ýokary hilli jemi RNK-ny çalt we täsirli çykaryň.
Öýjükleriň jemi RNA izolýasiýa toplumy--Lyokary arassalanan we ýokary hilli jemi RNK dürli medeniýetli öýjüklerden 11 minutda alyp bolýar.
Ösümlikleriň jemi RNA izolýasiýa toplumy--Az polisakarid we polifenol düzümi bolan ösümlik nusgalaryndan ýokary hilli jemi RNK-ny çalt çykaryň.
Wirus RNK izolýasiýa toplumy- Wirus RNK-ny plazma, serum, öýjüksiz beden suwuklyklary we öýjük medeniýeti adatdan daşary hadysalary ýaly nusgalardan çalt izolirläň we arassalaň.
Om Genomiki DNK çykarmak
Genomiki DNK çykarmak nusgalaryna toprak, nejisler, gan, öýjükler, haýwan dokumalary, ösümlikler, wiruslar we ş.m. girýär. Genomiki DNK çykarmak ferment siňdirişinde, DNK kitaphanasynyň gurluşygynda, PCR, antikor taýýarlanyşynda, Günbatar blot gibridizasiýa derňewinde, gen çipinde, ýokary - yzygiderlilik we beýleki synaglar.
Foregene bilen baglanyşyklyDNK izolýasiýa toplumlary
Haýwan dokumasynyň DNK izolýasiýa toplumy- Haýwan dokumalary, öýjükler we ş.m. ýaly köp çeşmelerden genom DNK-ny çalt çykarmak we arassalamak.
Ganyň DNK Midi toplumy (1-5ml)- antikoagulirlenen gandan ýokary hilli genom DNK-ny çalt arassalaň (1-5ml).
Buccal Swab / FTA Card DNK izolýasiýa toplumy- Buccal swab / FTA Card nusgalaryndan ýokary hilli genom DNK-ny çalt arassalaň.
Ösümlik DNK izolýasiýa toplumy- Ösümlik nusgalaryndan ýokary hilli genom DNK-ny çalt arassalaň we alyň (polisakaridleri we polifenol ösümlik nusgalaryny goşmak bilen)
As Plazmidi çykarmak
Plazmid öýjüklerdäki tegelek ownuk molekulalaryň DNK görnüşidir, DNK rekombinasiýasy üçin umumy daşaýjydyr.Plazmidi çykarmagyň usuly, RNK-ny aýyrmak, plazmidi bakterial genom DNK-dan aýyrmak we has arassa plazmidi almak üçin belok we beýleki hapalary aýyrmakdyr.
General Plazmid Mini Kit- Üýtgetmek we ferment siňdiriş ýaly adaty molekulýar biologiýa synaglary üçin ýokary hilli plazmid DNK-ny üýtgedilen bakteriýalardan çalt arassalaň.
④ Beýleki çykaryş görnüşleri, miRNA çykarmak we ş.m.
Haýwan miRNA izolýasiýa toplumy- Dürli haýwan dokumalaryndan we öýjüklerinden 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA ownuk RNK böleklerini çalt we aňsatlyk bilen çykaryň.
Ⅳ Nuklein kislotasyny çykarmak we arassalamak netijesis
Nuklein kislotasynyň esasy gurluşynyň bitewiligini üpjün etmek.
Protein Beloklaryň, şekerleriň, lipidleriň we beýleki makromolekulalaryň päsgelçiligini azaltmak
Nuklein kislotasynyň nusgalarynda fermenti saklap bilýän organiki erginli ýa-da metal ionlarynyň ýokary konsentrasiýasy bolmaly däldir.
④ RNK we beýleki nuklein kislotasynyň hapalanmagy DNK çykarylanda ýok edilmeli we tersine.
Iş wagty: Noýabr-24-2022
